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選擇一款適合梯度PCR儀應該注意什么
更新時(shí)間:2021-02-04 點(diǎn)擊次數:1145次
PCR技術(shù)是一種用于放大擴增特定的DNA的分子生物學(xué)技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復制,目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的有:普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀、熒光定量PCR儀(qPCR)以及數字PCR儀(dPCR)等。而使用多是梯度PCR儀和熒光定量PCR儀,那么怎樣選擇一款適合自己的梯度PCR儀呢?
1 準確的溫度控制系統
對PCR儀來(lái)說(shuō),溫度控制指標主要是指溫度的準確性、均一性、以及升降溫速度。
溫度的準確性:是指樣品孔溫度與設定溫度的一致性,它直接關(guān)系到實(shí)驗的成敗。由于PCR是一個(gè)幾何級數擴增的過(guò)程,不論是變性、退火還是延伸都需要準確控制溫度,對退火溫度而言溫控顯的尤為重要,有時(shí)1°甚至0.5°的差異也能決定實(shí)驗的成功與失敗,所謂差之毫厘,謬之千里。因而對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著(zhù)質(zhì)量。eg:HealForce B960的溫度準確性嚴格控制在≤0.1℃。(國內大部分廠(chǎng)家僅要求≤0.2℃)
溫度的均一性:是指樣品孔間的溫度差異,它關(guān)系到在不同樣品孔進(jìn)行反應結果的一致性。有用戶(hù)發(fā)現用同樣的樣品,同樣的PCR反應程序,后的結果竟然差異非常明顯,或許就是因為不同位置的溫度不均勻所致。同時(shí)位置邊緣效應對PCR實(shí)驗可重復性影響非常明顯。
升降溫速率:更快的升降溫速度,可以縮短反應進(jìn)行的時(shí)間,而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時(shí)間,能提高PCR反應的特異性。
2 儀器的功能性和人性化設計
越友好的操作界面、完善的功能以及人性化的設計更能吸引用戶(hù)。(熱蓋、樣品座、軟件)
熱蓋:現在的PCR儀一般均配備熱蓋,熱蓋溫度設為105℃,使樣品管頂部的溫度達到105℃左右,蒸發(fā)的反應液就不會(huì )產(chǎn)生凝集在管蓋上而改變反應體積,這樣用戶(hù)就無(wú)需再向反應管內加石蠟油,直接減少后繼反應的麻煩。HealForce熱蓋溫度范圍為:20-110℃。
樣品座:PCR反應多在0.2或者0.5的管子中進(jìn)行,多數PCR儀也配備了不同的可更換樣品槽適配不同的樣品管。HealForce PCR儀一個(gè)槽內帶有0.2和0.5兩種不同樣品孔,不需更換基座就可以分別使用兩種不同的反應管,或者96孔板,避免了換基座的麻煩。
軟件:新的PCR儀都比較注重程序編寫(xiě)的簡(jiǎn)易性。大屏幕,顯示實(shí)時(shí)信息,倒計時(shí),記憶存儲多個(gè)程序、自動(dòng)斷電保護等都有助于實(shí)驗室中的復雜環(huán)境使用。HealForce T960和B960 PCR儀基于Windows操作系統,配備了PC端軟件,可以實(shí)現智能化操控。